Plasmide Double Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1: sc-401880-NIC

CHRNA1 code la sous-unité α1 du récepteur nicotinique de l’acétylcholine de type musculaire, un canal cationique ligand-dépendant essentiel à la transmission synaptique rapide au niveau de la jonction neuromusculaire. Lors de la liaison de l’acétylcholine, l’ouverture du récepteur entraîne une entrée de Na⁺ et une dépolarisation membranaire, qui se couple aux processus d’excitation–contraction via l’activation en aval de canaux voltage-dépendants et la signalisation Ca²⁺. La fonction de CHRNA1 s’intègre aux voies de regroupement et de stabilisation des récepteurs postsynaptiques impliquant la signalisation agrine–LRP4–MuSK et l’assemblage dépendant de la rapsyne. Des perturbations génétiques ou fonctionnelles de ce complexe récepteur sont impliquées dans les syndromes myasthéniques congénitaux et d’autres défauts de la transmission neuromusculaire, faisant de CHRNA1 une cible majeure pour les études mécanistiques de la physiologie synaptique et de la biogenèse des récepteurs.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRNA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRNA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRNA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRNA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.