Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401880-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHRNA1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1: sc-65829
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401880-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401880-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRNA1 kodiert die α1‑Untereinheit des muskeltypischen nikotinischen Acetylcholinrezeptors, eines ligandengesteuerten Kationenkanals, der für die schnelle synaptische Übertragung an der neuromuskulären Endplatte essenziell ist. Nach Bindung von Acetylcholin öffnet sich der Rezeptor und bewirkt einen Na⁺‑Einstrom sowie eine Membrandepolarisation, die über die nachgeschaltete Aktivierung spannungsabhängiger Kanäle und Ca²⁺‑Signalwege an die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung weitergeleitet wird. Die Funktion von CHRNA1 ist in Mechanismen der postsynaptischen Rezeptor‑Clusterbildung und ‑Stabilisierung eingebettet, an denen der Agrin‑LRP4‑MuSK‑Signalweg und die rapsyn‑abhängige Assemblierung beteiligt sind. Genetische oder funktionelle Störungen dieses Rezeptorkomplexes werden mit kongenitalen myasthenen Syndromen und verwandten Defekten der neuromuskulären Transmission in Verbindung gebracht, wodurch CHRNA1 ein zentrales Ziel für mechanistische Untersuchungen der Synapsenphysiologie und der Rezeptorbiogenese darstellt.
Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHRNA1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHRNA1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHRNA1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHRNA1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.