Plásmido CRISPR de Activación (h) Nibrin: sc-401723-ACT

El gen humano **NBN** codifica **nibrina**, un componente esencial del complejo **MRN** (MRE11–RAD50–NBN), que detecta las roturas de doble cadena del ADN y coordina la señalización del daño. La nibrina favorece la activación de **ATM**, el anclaje de los extremos del ADN y la elección de la vía entre la recombinación homóloga y la unión de extremos no homólogos, promoviendo así la estabilidad del genoma y un control adecuado del punto de control de la fase S. La alteración de la función de **NBN** se asocia con una reparación deficiente de las roturas de doble cadena, inestabilidad cromosómica e hipersensibilidad al estrés genotóxico, con relevancia para el síndrome de roturas de Nijmegen y la biología de la predisposición al cáncer. Estas propiedades hacen de **NBN** un nodo ampliamente utilizado para estudiar las vías de respuesta al daño del ADN, el estrés de replicación y los mecanismos de mantenimiento del genoma en células humanas.

Nibrin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NBN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nibrin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NBN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NBN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nibrin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NBN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nibrin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nibrin en células tumorales con expresión de NBN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.