NHERF-1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-424152-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- NHERF-1O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase NHERF-1 (m) e o Plasmídeo Double Nickase NHERF-1 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Slc9a3r1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:NHERF-1 Anticorpo (A-7): sc-271552
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
NHERF-1 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-424152-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc9a3r1 codifica a NHERF-1, uma proteína de andaime contendo domínio PDZ que organiza complexos de sinalização na membrana e conecta transportadores e receptores ao citoesqueleto de actina. Em células de camundongo, a NHERF-1 coordena processos como o transporte de íons e o tráfego de receptores ao interagir com proteínas incluindo trocadores Na⁺/H⁺, GPCRs e receptores tirosina-quinase, influenciando assim vias a jusante que controlam a polaridade epitelial e a integração de sinais. Por meio dessas funções de andaime, a NHERF-1 ajuda a regular a dinâmica da sinalização por fosfoinositídeos e a remodelação do citoesqueleto na membrana plasmática. A desregulação de complexos dependentes de NHERF-1 tem sido associada na literatura a alterações na homeostase epitelial e em programas de sinalização relevantes para a fisiologia renal e gastrointestinal, bem como à modulação de vias oncogênicas em sistemas modelo.
NHERF-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Slc9a3r1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Slc9a3r1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Slc9a3r1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Slc9a3r1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.