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NHE-1双切口酶质粒(h) | sc-400748-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NHE-1双切口酶质粒(h2) | sc-400748-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC9A1 编码质膜 Na⁺/H⁺ 交换体 NHE‑1,它是细胞内 pH、细胞体积以及钠离子稳态的关键调控因子。NHE‑1 通过以胞外钠离子交换并外排质子,支持多种对 pH 敏感的过程,包括细胞骨架重塑、黏着斑动态变化和细胞运动;同时它与 MAPK 信号通路、Rho 家族 GTP 酶通路以及离子转运网络相互连接。NHE‑1 的活性会影响上皮与心脏生理、神经元兴奋性,以及细胞对渗透压和代谢应激的响应。SLC9A1/NHE‑1 功能失调已被认为与缺血相关损伤、高血压相关重塑、癌细胞侵袭表型以及神经退行性应激反应等情境有关,因此是开展机制研究的一个重要节点。
NHE-1 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 SLC9A1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对SLC9A1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏SLC9A1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了SLC9A1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。