NF45 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402042-ACT

ILF2 codifica a NF45, uma proteína multifuncional de ligação a RNA e DNA que forma um heterodímero com ILF3 (NF90/NF110) para regular a transcrição, o processamento do pré-mRNA, a estabilidade do mRNA e a tradução. A NF45 participa da regulação gênica associada à RNA polimerase II, de complexos ribonucleoproteicos responsivos ao estresse e de programas de proliferação celular, e tem sido relacionada ao controle da expressão de citocinas e de genes antivirais. Por meio dessas atividades, ILF2/NF45 influencia a progressão do ciclo celular, a manutenção do genoma e as respostas a estímulos inflamatórios. A desregulação da expressão de ILF2 ou de complexos contendo NF45 foi relatada em contextos de crescimento oncogênico, desequilíbrio de sinalização imune e interações vírus–hospedeiro, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de redes de regulação gênica.

NF45 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ILF2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NF45 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ILF2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ILF2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NF45. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ILF2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NF45 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NF45 em células tumorais com expressão de ILF2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.