Plasmide CRISPR/Cas9 KO Neuroplastin (m): sc-422859

Présentation

Le gène murin **Nptn** code la neuroplastine, une protéine d’adhérence cellulaire glycosylée de la superfamille des immunoglobulines, enrichie aux synapses et dans d’autres compartiments membranaires, où elle favorise la croissance des neurites, l’organisation synaptique et la plasticité dépendante de l’activité. La neuroplastine agit aussi comme sous-unité auxiliaire essentielle des **ATPases Ca²⁺ de la membrane plasmique (PMCA)**, reliant **Nptn** à l’homéostasie du calcium intracellulaire et à une signalisation régulée par le Ca²⁺ qui façonne l’excitabilité et l’expression génique. Par ces fonctions, **Nptn** contribue au développement des circuits et aux processus de remodelage synaptique pertinents pour des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ainsi que pour des atteintes plus larges résultant d’une dérégulation de la gestion du calcium. Sa localisation membranaire et son réseau d’interactions en font un point d’entrée utile pour étudier la signalisation dépendante de l’adhérence, la maturation des synapses et les voies dépendantes du calcium dans des modèles neuronaux et gliaux murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Neuroplastin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nptn dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nptn, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nptn à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Neuroplastin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nptn pour l'étude de la signalisation de Neuroplastin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nptn essentiels à la fonction de Neuroplastin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nptn pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Neuroplastin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Neuroplastin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nptn. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Neuroplastin plasmide HDR (m) et le Neuroplastin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nptn pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nptn définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.