Neuronatin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421919

Übersicht

Das Mausgen **Nnat** kodiert **Neuronatin**, ein kleines, geprägtes (imprinted) und entwicklungsreguliertes Protein, das im Nervensystem sowie in endokrinen Geweben angereichert ist. Neuronatin lokalisiert überwiegend an der Membran des endoplasmatischen Retikulums (ER) und steht im Zusammenhang mit der Kontrolle der intrazellulären Calciumdynamik, der ER-Homöostase und der Kopplung metabolischer Signale an zelluläre Zustandsentscheidungen. Über Effekte auf Ca2+-abhängige Signalwege und stressresponsive Pfade wurde Neuronatin mit neuronaler Differenzierung, synaptischer Funktion, der Biologie von Adipozyten und pankreatischen β-Zellen sowie der Regulation der Energiebilanz in Verbindung gebracht. Eine fehlregulierte **NNAT**-Expression wurde in Kontexten metabolischer Dysfunktion, neuroentwicklungsbezogener Phänotypen und tumorassoziierter Zellprogramme beschrieben, was **Nnat** zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Entwicklung und zu zellulären Stressantworten macht.

Das Neuronatin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nnat-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nnat-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nnat nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Neuronatin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nnat-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Neuronatin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nnat-Exone abzielen, die für die Neuronatin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nnat-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Neuronatin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Neuronatin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nnat-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Neuronatin HDR-Plasmid (m) und Neuronatin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nnat-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nnat-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.