Neurogenin 1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421860-ACT

Neurog1 kodiert Neurogenin 1, einen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor, der im Nervensystem der Maus als Masterregulator der Neurogenese wirkt. Er fördert die Festlegung auf die neuronale Zelllinie und die Differenzierung, indem er pro-neuronale Transkriptionsprogramme aktiviert und den Austritt aus dem Zellzyklus koordiniert, wobei er mit entwicklungsbiologischen Signalnetzwerken wie der durch Notch/Delta vermittelten lateralen Inhibition und Kaskaden neurogener bHLH-Faktoren verknüpft ist. Die Aktivität von Neurogenin 1 prägt die Entwicklung sensorischer Neurone sowie die neuronale Musterbildung in Kortex und Rückenmark; eine Fehlregulation neurogener Differenzierungsprogramme ist relevant für Studien zu angeborenen neuroentwicklungsbedingten Störungen, Defekten der Neuralrohr-Patterning und einer aberranten Festlegung neuronaler Zellschicksale. Da Neurog1 vielen Markern neuronaler Subtypen und Differenzierungseffektoren upstream vorgeschaltet ist, wird es häufig eingesetzt, um die transkriptionelle Kontrolle der Dynamik neuronaler Stamm-/Vorläuferzellen und der neuronalen Reifung zu untersuchen.

Neurogenin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Neurog1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Neurogenin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Neurog1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Neurog1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Neurogenin 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Neurog1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Neurogenin 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Neurogenin 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Neurog1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.