Plasmide CRISPR/Cas9 KO Neu4 (h): sc-406284

Présentation

NEU4 code la neuraminidase humaine 4 (Neu4), une sialidase qui retire les acides sialiques terminaux des glycoprotéines et des glycolipides, modulant ainsi le renouvellement des glycoconjugués ainsi que la signalisation à la surface cellulaire et au niveau des organites. L’activité de Neu4 influence les états de sialylation lysosomale et mitochondriale et peut affecter des processus tels que le trafic membranaire, l’autophagie et les réponses au stress métabolique via des modifications de la composition des glycannes. En remodelant les interactions dépendantes de la sialylation, NEU4 contribue à la régulation de la signalisation immunitaire et aux décisions de destinée cellulaire dans des contextes où les profils de glycosylation sont remaniés. Une activité sialidase dérégulée et une sialylation aberrante ont été associées à des phénotypes inflammatoires et à des modifications liées au cancer de l’adhérence et de l’invasion cellulaires, faisant de NEU4 une cible utile pour des études mécanistiques en glycobiologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Neu4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NEU4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NEU4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NEU4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Neu4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NEU4 pour l'étude de la signalisation de Neu4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NEU4 essentiels à la fonction de Neu4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NEU4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Neu4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Neu4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NEU4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Neu4 plasmide HDR (h) et le Neu4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NEU4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NEU4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.