Plasmide CRISPR/Cas9 KO netrin-4 (h): sc-403229
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- netrin-4 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique netrin-4, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: netrin-4 Antibody (A-7): sc-365280
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO netrin-4 (h) | sc-403229 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
NTN4 code la nétrine‑4, un facteur de guidage sécrété apparenté aux laminines, qui module les interactions cellule–matrice et la migration directionnelle. La nétrine‑4 participe au guidage axonal, à l’organisation des réseaux vasculaires et à la morphogenèse tissulaire en influençant l’organisation de la matrice extracellulaire et la signalisation médiée par des récepteurs, qui façonne la dynamique du cytosquelette. Dans des contextes endothéliaux et épithéliaux, elle peut modifier l’adhérence et les propriétés de barrière via une communication croisée avec des voies associées aux intégrines et aux laminines. Une expression ou une signalisation dérégulée de NTN4 a été associée à une angiogenèse anormale et à un comportement invasif dans le cancer et d’autres troubles impliquant un remodelage altéré de la membrane basale.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO netrin-4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NTN4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NTN4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NTN4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine netrin-4.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NTN4 pour l'étude de la signalisation de netrin-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de NTN4 essentiels à la fonction de netrin-4
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NTN4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le netrin-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le netrin-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NTN4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le netrin-4 plasmide HDR (h) et le netrin-4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NTN4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NTN4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.