Date published: 2026-7-20

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NELF-E Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401932-ACT

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Schede Tecniche
  • Specie Target: human
  • 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
  • NELF-E Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
  • NELF-E CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
  • Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
  • I gRNA codificati dal NELF-E CRISPR Activation Plasmid (h) e dal NELF-E CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di NELFE. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
  • In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NELF-E Antibody (F-9): sc-377052
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    NELF-E Plasmide di attivazione CRISPR (h)

    sc-401932-ACT
    20 µg
    $397.00

    Il gene umano **NELFE** codifica **NELF-E**, una subunità legante l’RNA del complesso **NELF** (Negative Elongation Factor), che impone una pausa prossimale al promotore della RNA polimerasi II e modella le fasi iniziali dell’allungamento trascrizionale. Coordinandosi con **DSIF** e **P-TEFb**, NELF-E contribuisce a regolare la tempistica della trascrizione, i programmi genici responsivi agli stimoli e il processamento co-trascrizionale dell’RNA, incluso l’accoppiamento con gli eventi al 5′. Questo controllo è centrale in vie che governano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e le risposte allo stress, in cui dinamiche alterate dell’allungamento possono rimodellare le reti di espressione genica. La disregolazione della pausa trascrizionale e del controllo dell’allungamento, inclusi i componenti del complesso NELF, è stata collegata a programmi di crescita e di linea cellulare aberranti osservati in diversi contesti rilevanti per la malattia, rendendo **NELFE** un nodo utile per studi meccanicistici della regolazione trascrizionale.

    NELF-E Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NELFE senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

    NELF-E Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NELFE nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

    Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NELFE, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NELF-E. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NELFE nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NELF-E nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NELF-E nelle cellule tumorali con espressione di NELFE silenziata o ridotta.

    Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.