NEDD4 Double Nickase Plasmid (h): sc-401748-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NEDD4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NEDD4 Double-Nickase-Plasmid (h) und NEDD4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NEDD4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NEDD4: sc-518160
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NEDD4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401748-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NEDD4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401748-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes NEDD4 kodiert eine E3-Ubiquitin-Protein-Ligase, die die Übertragung von Ubiquitin auf Substrate katalysiert und dadurch Proteinturnover, Trafficking und die Stärke von Signalwegen reguliert. Über seine C2- und WW-Domänen erkennt NEDD4 Zielproteine mit PY-Motiven und beeinflusst unter anderem PI3K–AKT-Signalisierung, Endozytose und die Homöostase von Membranrezeptoren. Die NEDD4-abhängige Ubiquitinierung moduliert epitheliale Polarität und Programme der Zellmigration und wurde in verschiedenen zellulären Kontexten mit der Regulation von Tumorsuppressoren und Wachstumsfaktorrezeptoren in Verbindung gebracht. Eine fehlregulierte NEDD4-Aktivität und veränderte Substratspezifität werden mit einer krebsassoziierten Umverdrahtung von Signalnetzwerken sowie veränderten immunologischen und neuronalen Prozessen assoziiert, was NEDD4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur ubiquitinvermittelten Regulation macht.
NEDD4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NEDD4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NEDD4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NEDD4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NEDD4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.