Plásmido CRISPR de Activación (h) Nebulette: sc-406565-ACT

NEBL codifica la nebuleta, una proteína de unión a actina específica del músculo estriado que se localiza en el disco Z y ayuda a organizar la arquitectura de los filamentos finos en los cardiomiocitos. Mediante interacciones con la actina y componentes de andamiaje del disco Z, la nebuleta favorece el ensamblaje del sarcómero, la mecanotransducción y la estabilización de la función contráctil. La alteración de la expresión de NEBL o de la integridad de la proteína se asocia con desorganización miofibrilar y cambios en la fisiología del músculo cardíaco, lo que la hace relevante para estudios de remodelado del citoesqueleto y de vías asociadas a cardiomiopatías. Como gen humano, NEBL se examina con frecuencia en modelos de desarrollo cardíaco, respuestas al estrés y redes de señalización sarcomérica.

Nebulette El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NEBL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nebulette El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NEBL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NEBL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nebulette. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NEBL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nebulette en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nebulette en células tumorales con expresión de NEBL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.