Plasmide CRISPR/Cas9 KO NDUFS3 (h): sc-404639

Présentation

NDUFS3 code une sous-unité essentielle, codée par le noyau, du complexe I de la chaîne respiratoire mitochondriale (NADH:ubiquinone oxydoréductase), qui assure le transfert d’électrons du NADH vers l’ubiquinone et contribue au maintien de l’efficacité de la phosphorylation oxydative. En tant que composant structural central de ce complexe situé dans la membrane interne mitochondriale, NDUFS3 participe à l’assemblage et à la stabilité du complexe I, influençant le potentiel de membrane mitochondriale, la production d’ATP et l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène. La perturbation des sous-unités du complexe I, dont NDUFS3, est associée à une dysfonction mitochondriale pouvant affecter les tissus à forte demande énergétique ainsi que des réponses plus larges au stress cellulaire. NDUFS3 est donc pertinent pour les études de bioénergétique, de contrôle qualité mitochondrial et de reprogrammation métabolique dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NDUFS3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NDUFS3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NDUFS3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NDUFS3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NDUFS3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NDUFS3 pour l'étude de la signalisation de NDUFS3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NDUFS3 essentiels à la fonction de NDUFS3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NDUFS3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NDUFS3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NDUFS3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NDUFS3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NDUFS3 plasmide HDR (h) et le NDUFS3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NDUFS3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NDUFS3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.