Plásmido Doble Nickase (m) NDUFB5: sc-425783-NIC

Ndufb5 codifica NDUFB5, una subunidad accesoria del complejo I de la cadena respiratoria mitocondrial (NADH:ubiquinona oxidorreductasa) que favorece una transferencia eficiente de electrones desde el NADH hacia la ubiquinona y contribuye a la fosforilación oxidativa. El ensamblaje y la estabilidad adecuados del complejo I ayudan a mantener el potencial de membrana mitocondrial, la producción de ATP y la homeostasis redox, lo que vincula la función de NDUFB5 con el metabolismo energético celular y el control de las especies reactivas de oxígeno. En modelos de ratón, la alteración de componentes del complejo I se utiliza con frecuencia para estudiar la disfunción mitocondrial en respuestas al estrés bioenergético, la adaptación metabólica y las vías de muerte celular. Como factor del complejo I codificado en el núcleo, NDUFB5 es relevante para la investigación de los mecanismos de enfermedad mitocondrial y de fenotipos más amplios asociados con una fosforilación oxidativa deficiente.

NDUFB5 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ndufb5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ndufb5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ndufb5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ndufb5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.