Plásmido CRISPR de Activación (h) NDST1: sc-404078-ACT

NDST1 codifica la N-desacetilasa/N-sulfotransferasa 1, una enzima residente del aparato de Golgi que cataliza etapas clave de modificación durante la biosíntesis del heparán sulfato, incluida la N-desacetilación y la N-sulfatación de residuos de glucosamina. Estas reacciones configuran los patrones de sulfatación del heparán sulfato, que determinan la unión y las respuestas de señalización de factores de crecimiento, morfógenos y quimiocinas en la matriz extracelular y en proteoglucanos de la superficie celular. Mediante la modulación de vías dependientes de heparán sulfato como FGF, Wnt, Hedgehog y BMP, NDST1 influye en la adhesión celular, la migración, la diferenciación y el patrón tisular. La remodelación desregulada del heparán sulfato se ha vinculado con programas del desarrollo alterados y con señales del microambiente relevantes para la biología del cáncer, la inflamación y fenotipos neurológicos y vasculares, lo que motiva estudios mecanísticos de la arquitectura de los glicosaminoglucanos controlada por NDST1.

NDST1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NDST1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NDST1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NDST1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NDST1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NDST1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NDST1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NDST1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NDST1 en células tumorales con expresión de NDST1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.