NCS-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404303

Descripción general

NCS1 codifica el sensor neuronal de calcio 1 (NCS-1), una proteína conservada de unión a Ca²⁺ con motivo EF-hand que convierte los transitorios de calcio intracelular en señales funcionales en membranas y sinapsis. NCS-1 regula procesos como el tráfico vesicular y la exocitosis, el crecimiento de neuritas y la modulación de la función de receptores y canales iónicos mediante interacciones con dianas como las fosfatidilinositol 4-quinasas y complejos de señalización que moldean vías dependientes de fosfoinosítidos. En células humanas, NCS-1 contribuye al control dependiente de calcio de la excitabilidad neuronal y la plasticidad sináptica, conectando el flujo de Ca²⁺ inducido por estímulos con respuestas adaptativas posteriores. La alteración de la expresión o la señalización de NCS-1 se ha investigado en el contexto de fenotipos neuropsiquiátricos y neurodegenerativos, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la desregulación de la señalización por calcio.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NCS-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NCS1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NCS1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NCS1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NCS-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NCS1 para la investigación de la señalización de NCS-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NCS1 críticos para la función de NCS-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NCS1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NCS-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NCS-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NCS1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NCS-1 (h) y el plásmido HDR NCS-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NCS1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NCS1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.