Plásmido Doble Nickase (h) NCoA-3: sc-401496-NIC

NCOA3 codifica el coactivador del receptor nuclear 3 (NCoA-3/SRC-3), un coactivador transcripcional que vincula receptores nucleares activados por ligando y otros factores de transcripción con la remodelación de la cromatina y la transcripción impulsada por la ARN polimerasa II. NCoA-3 integra señales procedentes de receptores de hormonas esteroideas, así como de vías sensibles a factores de crecimiento, al reclutar acetiltransferasas de histonas y otros corre­guladores para regular programas génicos que controlan la proliferación, la diferenciación, el metabolismo y las respuestas al estrés. A través de estas funciones, NCOA3 influye en la progresión del ciclo celular y en redes transcripcionales vinculadas a la señalización endocrina y a la reprogramación transcripcional oncogénica. La alteración de la actividad de NCOA3 se ha asociado con una señalización desregulada de receptores hormonales y con fenotipos relacionados con el cáncer, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos del control transcripcional.

NCoA-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NCOA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NCOA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NCOA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NCOA3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.