NCKX5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405875

Übersicht

SLC24A5 kodiert NCKX5, einen kaliumabhängigen Natrium/Calcium-Austauscher, der die Ionhomöostase in Melanosomen reguliert und eine korrekte Melanogenese in pigmentbildenden Zellen unterstützt. Durch die Feinabstimmung des Ca²⁺-Fluxes und des Ionenhaushalts innerhalb des endomembranären Systems beeinflusst NCKX5 die Melaninsynthese, die Reifung der Melanosomen und Signalwege der Pigmentablagerung. Genetische Variation in SLC24A5 ist stark mit Unterschieden der menschlichen Pigmentierung im Normalbereich assoziiert, und eine veränderte Aktivität wird häufig im Kontext der Melanozytenbiologie untersucht. Als Membrantransporter mit Funktionen im intrazellulären Transport und in der Organellenfunktion bietet NCKX5 einen mechanistischen Ansatzpunkt, um die Kontrolle von Pigmentierungsprogrammen durch Ionentransport zu untersuchen.

Das NCKX5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC24A5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC24A5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC24A5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NCKX5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC24A5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NCKX5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC24A5-Exone abzielen, die für die NCKX5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC24A5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NCKX5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NCKX5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC24A5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NCKX5 HDR-Plasmid (h) und NCKX5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC24A5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC24A5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.