Plásmido CRISPR de Activación (h) NCAM/CD56: sc-400302-ACT

NCAM1 codifica la molécula de adhesión celular neural (NCAM/CD56), una glucoproteína de la superfamilia de las inmunoglobulinas que media interacciones célula–célula homofílicas y heterofílicas y regula la señalización dependiente de la adhesión. NCAM/CD56 contribuye al crecimiento de neuritas, la plasticidad sináptica, la migración y la remodelación del citoesqueleto mediante vías que incluyen Fyn/FAK, MAPK/ERK y las GTPasas de la familia Rho, y modula la organización de la superficie celular a través de la polisialilación. En el sistema inmunitario, NCAM/CD56 es un marcador definitorio de las células NK (natural killer) y se ha vinculado con la formación de la sinapsis inmunitaria y la función efectora. La expresión o la glicosilación desreguladas de NCAM1 se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, y se estudian con frecuencia en biología del cáncer, donde se implican programas alterados de adhesión e invasión.

NCAM/CD56 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NCAM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NCAM/CD56 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NCAM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NCAM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NCAM/CD56. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NCAM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NCAM/CD56 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NCAM/CD56 en células tumorales con expresión de NCAM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.