NAT-10 Lentiviral Activation Particles (h): sc-406713-LAC

NAT10 kodiert NAT-10, eine RNA-Acetyltransferase, die vor allem dafür bekannt ist, die Ablagerung von N4‑Acetylcytidin (ac4C) auf verschiedensten RNA-Substraten zu katalysieren und dadurch RNA-Stabilität, Translationseffizienz und die codonabhängige Decodierung zu beeinflussen. Über die RNA-Modifikation hinaus wird NAT-10 mit nukleolären und chromatinassoziierten Prozessen in Verbindung gebracht, darunter die Regulation der Ribosomenbiogenese sowie die Koordination zellzyklus- und DNA-schadensabhängiger Programme. Eine veränderte NAT10-Aktivität wurde mit dysreguliertem Wachstum, Stressantworten und einer Umgestaltung des Transkriptoms assoziiert, wie sie in verschiedenen Kontexten proliferativer und neuroentwicklungsbezogener Erkrankungen beobachtet werden, was NAT10 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der epitranskriptomischen RNA-Kontrolle macht. In humanen Zellen kann die Störung von NAT10 dabei helfen zu klären, wie ac4C-abhängige RNA-Verarbeitung mit Proteostase, Replikationsstress und dem Differenzierungszustand zusammenwirkt.

NAT-10 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente NAT10-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NAT-10 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der NAT10-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NAT-10-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen NAT10-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.