Particules Lentivirales d'Activation (h) Na⁺ CP type Xα: sc-407011-LAC

SCN10A code le canal sodique voltage-dépendant de type Na+ CP Xα (NaV1.8), une sous-unité α formant le pore qui permet une entrée de sodium résistante à la tétrodotoxine et la décharge répétitive dans les cellules excitables. En modulant l’initiation et la propagation des potentiels d’action, ce canal contribue à des programmes d’excitabilité membranaire qui s’articulent avec la signalisation nociceptive, le dialogue neuro-immun, et des réponses transcriptionnelles dépendantes de l’activité. Les variations génétiques humaines de SCN10A ont été associées à des traits de conduction cardiaque et à la susceptibilité aux arythmies, et une activité altérée de NaV1.8 a été liée à la neurophysiologie de la douleur et à l’hypersensibilité inflammatoire. Ces caractéristiques font de SCN10A une cible utile pour étudier la biophysique des canaux sodiques, les voies de signalisation pilotées par l’excitabilité, et les relations génotype–phénotype dans des systèmes modèles neuronaux et cardiaques.

Les particules d'activation lentivirales Na+ CP type Xα (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SCN10A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Na+ CP type Xα (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SCN10A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Na+ CP type Xα. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SCN10A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.