Na⁺ CP type Xα Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-407011-LAC

SCN10A codifica il canale del sodio voltaggio-dipendente Na+ CP di tipo Xα (NaV1.8), una subunità α che forma il poro e che sostiene un ingresso di sodio resistente alla tetrodotossina e la scarica ripetitiva nelle cellule eccitabili. Modellando l’inizio e la propagazione del potenziale d’azione, questo canale contribuisce a programmi di eccitabilità di membrana che si intersecano con la segnalazione nocicettiva, il crosstalk neuro‑immune e risposte trascrizionali dipendenti dall’attività. Le varianti genetiche umane in SCN10A sono state associate a caratteristiche della conduzione cardiaca e alla suscettibilità alle aritmie, e un’attività alterata di NaV1.8 è stata collegata alla neurofisiologia del dolore e all’ipersensibilità infiammatoria. Queste proprietà rendono SCN10A un bersaglio utile per indagare la biofisica dei canali del sodio, le vie di segnalazione guidate dall’eccitabilità e le relazioni genotipo–fenotipo in sistemi modello neuronali e cardiaci.

Le particelle di attivazione lentivirale Na+ CP type Xα (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SCN10A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Na+ CP type Xα (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SCN10A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Na+ CP type Xα. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SCN10A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.