Plasmide CRISPR d'Activation (h) Na⁺ CP type Xα: sc-407011-ACT

SCN10A code le canal sodique voltage‑dépendant Na+ CP de type Xα (Nav1.8), un canal résistant à la tétrodotoxine qui soutient l’initiation du potentiel d’action et les décharges répétitives dans les cellules excitables, en particulier au sein des neurones sensoriels périphériques. En modulant l’entrée de sodium et la dynamique de dépolarisation membranaire, Nav1.8 contribue à l’excitabilité neuronale, à la signalisation induite par les stimuli et à des programmes géniques dépendants de l’activité liés au remodelage des canaux ioniques. La régulation de SCN10A s’inscrit dans des processus plus larges d’électrophysiologie et de signalisation neuro‑inflammatoire qui influencent la nociception et la fonction des nerfs périphériques. Des variations génétiques et une expression dérégulée de SCN10A ont été associées à des phénotypes douloureux modifiés et à des caractéristiques de l’électrophysiologie cardiaque, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques des troubles liés à l’excitabilité.

Na+ CP type Xα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SCN10A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Na+ CP type Xα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SCN10A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SCN10A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Na+ CP type Xα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SCN10A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Na+ CP type Xα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Na+ CP type Xα dans les cellules tumorales présentant une expression de SCN10A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.