Na⁺ CP type Iβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422819

Übersicht

Scn1b kodiert die β1‑Untereinheit des Natriumkanals (Na+‑CP Typ Iβ), eine akzessorische Komponente, die das Gating spannungsabhängiger Natriumkanäle, deren Expression an der Zelloberfläche sowie die Stabilität des Kanalkomplexes in erregbaren Membranen moduliert. Über die Prägung von Initiation und Ausbreitung von Aktionspotenzialen hinaus ist SCN1B an Neuron‑Glia‑Interaktionen und Zelladhäsionsprozessen beteiligt, die die Netzwerkerregbarkeit und die Funktion myelinisierter Axone beeinflussen. Bei der Maus ist die Scn1b‑Aktivität eng mit Signalwegen verknüpft, die Membranerregbarkeit, synaptische Transmission und Anfallsanfälligkeit steuern; eine veränderte β1‑Funktion wurde mit Epilepsie und weiteren neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen Scn1b zu einem nützlichen Ziel, um Mechanismen zu untersuchen, die die Regulation von Ionenkanälen mit Erregbarkeit auf Schaltkreisebene und Modellen neurologischer Erkrankungen verknüpfen.

Das Na+ CP type Iβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Scn1b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Scn1b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Scn1b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Na+ CP type Iβ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Scn1b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Na+ CP type Iβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Scn1b-Exone abzielen, die für die Na+ CP type Iβ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Scn1b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Na+ CP type Iβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Na+ CP type Iβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Scn1b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Na+ CP type Iβ HDR-Plasmid (m) und Na+ CP type Iβ HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Scn1b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Scn1b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.