NARF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407124

Übersicht

NARF (nuclear prelamin A recognition factor) kodiert ein nukleäres Protein, das an der Prozessierung und Qualitätskontrolle von Lamin‑A‑Vorstufen beteiligt ist und so eine korrekte Organisation der Kernhülle sowie die Genomstabilität unterstützt. Durch die Interaktion mit Prelamin A und verwandten Komponenten der nukleären Lamina trägt NARF zu Signalwegen bei, die Proteostase mit der nukleären Architektur verknüpfen, und beeinflusst dadurch die Chromatinorganisation, DNA‑Schadensantworten und den Zellzyklusverlauf. Störungen der Lamin‑A‑Reifung und der Homöostase der Kernlamina stehen mit einem Spektrum von Laminopathien und progeroiden Phänotypen in Zusammenhang, wodurch NARF einen nützlichen Ansatzpunkt zur Untersuchung von Mechanismen nukleären Stresses darstellt. Die Funktion von humanem NARF ist zudem relevant für Modelle, die untersuchen, wie eine veränderte Kernstruktur Transkriptionsprogramme und zelluläre, mit dem Altern assoziierte Prozesse beeinflusst.

Das NARF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NARF-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NARF-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NARF nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NARF-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NARF-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NARF-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NARF-Exone abzielen, die für die NARF-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NARF-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NARF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NARF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NARF-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NARF HDR-Plasmid (h) und NARF HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NARF-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NARF-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.