Partículas Lentivirales de Activación (h) NARC-1: sc-402445-LAC

PCSK9 codifica NARC-1 (convertasa de proproteínas subtilisina/kexina tipo 9), una proteasa de serina secretada que regula la homeostasis del colesterol al promover la degradación lisosomal del receptor de LDL y, de este modo, modular la captación celular de lipoproteínas. NARC-1 se sintetiza como un cimógeno y sufre un procesamiento autocatalítico en la vía secretora, lo que vincula su función al tráfico del RE al Golgi y a las redes de proteostasis. La actividad alterada de PCSK9 influye en la abundancia de LDLR y en programas posteriores de manejo de lípidos en hepatocitos y otros tipos celulares sensibles. La desregulación de la señalización de PCSK9/NARC-1 se estudia ampliamente en el contexto de la dislipidemia y la biología del riesgo cardiometabólico, así como de procesos inflamatorios dependientes de lípidos.

Las partículas de activación lentiviral NARC-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PCSK9 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral NARC-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PCSK9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de NARC-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PCSK9 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.