Plasmide CRISPR/Cas9 KO NanogNB (h): sc-418788

Présentation

NANOGNB (NanogNB) est un gène humain apparenté à NANOG, impliqué dans des programmes de régulation associés à la pluripotence et à l’expression génique aux premiers stades du développement. En tant que paralogue/facteur apparenté du cœur des circuits de « stemness », NanogNB est étudié dans le contexte du contrôle transcriptionnel, de la spécification du destin cellulaire et du maintien de l’état épigénétique, avec un crosstalk potentiel avec les voies qui gouvernent l’autorenouvellement et la différenciation. Une expression altérée des gènes de la famille NANOG est fréquemment évaluée dans des modèles de plasticité des cellules tumorales, de biologie des cellules germinales et de reprogrammation, où des modifications des réseaux transcriptionnels de type cellule souche peuvent influencer la prolifération et l’engagement de lignée. NANOGNB constitue donc une cible pour analyser comment l’architecture régulatrice associée à NANOG contribue aux processus du développement et à des phénotypes cellulaires pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NanogNB (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NANOGNB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NANOGNB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NANOGNB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NanogNB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NANOGNB pour l'étude de la signalisation de NanogNB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NANOGNB essentiels à la fonction de NanogNB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NANOGNB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NanogNB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NanogNB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NANOGNB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NanogNB plasmide HDR (h) et le NanogNB (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NANOGNB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NANOGNB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.