Plasmide CRISPR d'Activation (h) NALP1: sc-402588-ACT

Le gène humain NLRP1 (NALP1) code un récepteur cytosolique de reconnaissance de motifs qui initie l’assemblage de l’inflammasome en réponse à des signaux de stress cellulaire et à des signaux associés aux agents pathogènes. Lorsqu’il est activé, NALP1 favorise l’activation de la caspase-1 dépendante d’ASC, ce qui entraîne la maturation de l’IL‑1β et de l’IL‑18 et relie la détection innée aux programmes de mort cellulaire inflammatoire. Cette voie s’entrecroise avec l’amorçage (priming) via NF‑κB, la protéostasie et la signalisation des signaux de danger, modulant la production de cytokines et l’immunité des barrières. Une signalisation NLRP1 dérégulée a été impliquée dans des phénotypes auto-inflammatoires et auto-immuns, des affections cutanées inflammatoires et, plus largement, des mécanismes de maladies inflammatoires pertinents pour l’homéostasie tissulaire et la défense de l’hôte.

NALP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NLRP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NALP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NLRP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NLRP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NALP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NLRP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NALP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NALP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NLRP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.