Plasmide CRISPR/Cas9 KO NaBC1 (h): sc-405950

Présentation

BCAS1 (brain enriched myelin associated protein 1), également appelé NaBC1, est un gène humain dont l’expression est enrichie dans le système nerveux central et qui est largement utilisé comme marqueur des cellules de la lignée oligodendrocytaire et de la myélinisation active. Son expression est associée aux programmes de différenciation des oligodendrocytes et de formation de la myéline, ce qui le relie aux processus cellulaires qui gouvernent l’isolation des axones et la maturation de la substance blanche. Une expression altérée de BCAS1/NaBC1 a été rapportée dans des études portant sur des contextes démyélinisants et neurodégénératifs, ce qui appuie sa pertinence pour l’étude des mécanismes de perte de myéline et de réparation. En tant que facteur associé à une lignée cellulaire, BCAS1 constitue un point d’entrée pour disséquer les réseaux transcriptionnels et de protéostasie qui façonnent les transitions d’état des oligodendrocytes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NaBC1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BCAS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BCAS1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BCAS1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NaBC1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BCAS1 pour l'étude de la signalisation de NaBC1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BCAS1 essentiels à la fonction de NaBC1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BCAS1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NaBC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NaBC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BCAS1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NaBC1 plasmide HDR (h) et le NaBC1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BCAS1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BCAS1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.