N-Ras Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400180-ACT

NRAS codifica a pequena GTPase humana N-Ras, um interruptor molecular associado à membrana que alterna entre os estados ligados a GDP e a GTP para retransmitir sinais de receptores tirosina-quinase e de outras entradas a montante. A N-Ras ativa regula vias centrais de crescimento e sobrevivência, incluindo RAF–MEK–ERK (MAPK) e PI3K–AKT, influenciando a proliferação, a diferenciação e a dinâmica do citoesqueleto. A sinalização de NRAS desregulada é frequentemente estudada em contextos oncogênicos, nos quais alterações no fluxo das vias promovem programas transcricionais aberrantes e a aptidão celular. Como nó central na sinalização dirigida por Ras, o NRAS é amplamente utilizado para investigar o redirecionamento de vias, a regulação por feedback e respostas dependentes do contexto a estímulos extracelulares.

N-Ras O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NRAS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

N-Ras O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NRAS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NRAS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de N-Ras. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NRAS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de N-Ras no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via N-Ras em células tumorais com expressão de NRAS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.