Plasmide CRISPR/Cas9 KO N-CoR (m): sc-422771

Présentation

Le gène murin Ncor1 code le corépresseur des récepteurs nucléaires 1 (N‑CoR), une protéine d’échafaudage qui assemble des complexes de répression transcriptionnelle avec HDAC3, TBL1/TBLR1 et d’autres facteurs afin de réguler l’accessibilité de la chromatine et l’expression génique. N‑CoR module la signalisation des récepteurs nucléaires et des réseaux transcriptionnels plus larges contrôlant la différenciation, l’homéostasie métabolique et la programmation des cellules immunitaires, notamment via la régulation d’ensembles de gènes inflammatoires. Par une désacétylation coordonnée et le recrutement de corépresseurs, Ncor1 influence l’engagement de lignée et les réponses cellulaires aux signaux hormonaux et aux cytokines. La dérégulation de la répression dépendante de N‑CoR a été associée, dans des modèles expérimentaux, à des états transcriptionnels aberrants pertinents pour la biologie du cancer, des phénotypes neurodéveloppementaux et des dysfonctionnements immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO N-CoR (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ncor1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ncor1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ncor1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine N-CoR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ncor1 pour l'étude de la signalisation de N-CoR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ncor1 essentiels à la fonction de N-CoR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ncor1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le N-CoR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le N-CoR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ncor1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le N-CoR plasmide HDR (m) et le N-CoR (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ncor1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ncor1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.