Plasmide CRISPR d'Activation (m) N-CoR: sc-422771-ACT

Le gène murin Ncor1 code N-CoR (nuclear receptor corepressor 1), un corépresseur d’échafaudage qui assemble des complexes de remodelage de la chromatine contenant HDAC3 afin d’imposer la répression transcriptionnelle au niveau des récepteurs nucléaires et d’autres facteurs de transcription spécifiques de séquence. En régulant l’acétylation des histones et l’accessibilité de la chromatine, N-CoR influence la spécification des lignages, les programmes géniques inflammatoires et l’homéostasie métabolique, en intégrant des signaux issus des récepteurs des hormones stéroïdiennes/thyroïdiennes, de Notch et des voies associées à NF-κB. Une répression altérée dépendante de NCOR1 a été associée à des réponses immunitaires dérégulées, à des phénotypes neurodéveloppementaux ainsi qu’à des états transcriptionnels métaboliques et oncogéniques, ce qui en fait un nœud clé du contrôle épigénétique de l’identité cellulaire. En tant que régulateur conservé des réseaux transcriptionnels, N-CoR est fréquemment étudié dans des contextes tels que l’activation des macrophages, la biologie des adipocytes et les transitions de la chromatine liées à la différenciation.

N-CoR Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ncor1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

N-CoR Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ncor1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ncor1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de N-CoR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ncor1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de N-CoR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie N-CoR dans les cellules tumorales présentant une expression de Ncor1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.