Plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin X (h): sc-402204

Présentation

Le gène humain **MYO10** code la myosine X, un moteur non conventionnel basé sur l’actine, localisé à l’extrémité des filopodes et impliqué dans l’initiation, l’extension et le transport de cargos au sein des filopodes. La myosine X établit un lien entre le remodelage de l’actine, le trafic des intégrines et la dynamique d’adhésion cellule–matrice, soutenant la migration dirigée, la croissance des neurites et des processus morphogénétiques. En coordination avec des régulateurs du cytosquelette et des voies de trafic membranaire, **MYO10** influence des processus tels que l’endocytose, la formation de protrusions et la réponse aux signaux de guidage. Une expression ou une fonction dérégulée de **MYO10** a été associée à une motilité cellulaire altérée et à un comportement invasif dans des modèles pertinents pour la maladie, ce qui en fait une cible utile pour étudier les mécanismes couplant l’organisation du cytosquelette à la signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin X (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYO10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYO10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYO10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Myosin X.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYO10 pour l'étude de la signalisation de Myosin X, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYO10 essentiels à la fonction de Myosin X
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYO10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Myosin X plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Myosin X plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYO10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Myosin X plasmide HDR (h) et le Myosin X (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYO10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYO10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.