Plasmide Double Nickase (m) myoglobin: sc-421575-NIC

Le gène Mb chez la souris code la myoglobine, une protéine de liaison à l’oxygène contenant un hème, enrichie dans le muscle cardiaque et les muscles squelettiques oxydatifs, où elle favorise le stockage et la diffusion intracellulaires de l’oxygène. En tamponnant la disponibilité en oxygène, la myoglobine contribue au maintien de la phosphorylation oxydative mitochondriale et limite le stress métabolique lié à l’hypoxie lors des variations de charge de travail. L’expression de Mb et la chimie rédox de la myoglobine interfèrent avec la gestion de l’oxyde nitrique et des espèces réactives de l’oxygène, influençant l’énergétique musculaire et la régulation vasculaire. Les modifications de l’abondance ou de la fonction de la myoglobine sont souvent étudiées dans des contextes d’ischémie, de cardiomyopathie et d’adaptation à l’exercice afin de comprendre l’homéostasie de l’oxygène dans le muscle et les réponses au stress.

myoglobin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Mb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Mb. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Mb. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Mb.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.