Plasmide CRISPR/Cas9 KO myoglobin (h): sc-401370

Présentation

MB code la myoglobine, une protéine de liaison à l’oxygène contenant un groupement hème, qui facilite le stockage intracellulaire et la diffusion de l’oxygène dans le muscle strié, soutenant le métabolisme aérobie lorsque la demande en oxygène fluctue. En jouant un rôle de tampon sur la disponibilité en oxygène, la myoglobine influence la phosphorylation oxydative mitochondriale, l’homéostasie rédox et les réponses à l’hypoxie ainsi qu’aux espèces réactives de l’azote et de l’oxygène. Des altérations de l’expression ou de la fonction de MB ont été étudiées dans le contexte des myopathies, des lésions musculaires liées à l’ischémie et, plus largement, de l’adaptation métabolique des cellules musculaires. En oncologie et en biologie cardiovasculaire, les mécanismes de gestion de l’oxygène associés à la myoglobine et les voies du stress oxydant sont souvent examinés comme déterminants de la fitness cellulaire en conditions de faible disponibilité en oxygène.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO myoglobin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine myoglobin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MB pour l'étude de la signalisation de myoglobin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MB essentiels à la fonction de myoglobin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le myoglobin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le myoglobin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le myoglobin plasmide HDR (h) et le myoglobin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.