Plasmide CRISPR d'Activation (h) Myoferlin: sc-403110-ACT

Le gène humain **MYOF** code la myoferrline (myoferlin), une grande protéine de la famille des ferlins associée à la membrane, qui régule la fusion vésiculaire, l’endocytose et la réparation membranaire via une liaison aux lipides dépendante du Ca²⁺ et la coordination d’événements de trafic à la membrane plasmique. La myoferrline favorise la stabilisation et le recyclage des récepteurs à activité tyrosine kinase, ce qui l’associe à la dynamique de la signalisation par les facteurs de croissance, notamment les voies dépendantes d’EGFR et les cascades PI3K/AKT et MAPK en aval. Elle est également impliquée dans le remodelage du cytosquelette, l’exocytose et la migration cellulaire, avec une pertinence fonctionnelle dans la myogenèse et le comportement angiogénique des cellules endothéliales. Une expression dérégulée de **MYOF** a été associée à des états de trafic membranaire altérés observés dans des modèles d’invasion et de métastase des cellules cancéreuses, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la plasticité de la signalisation et les interactions avec le microenvironnement tumoral.

Myoferlin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYOF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Myoferlin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYOF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYOF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Myoferlin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYOF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Myoferlin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Myoferlin dans les cellules tumorales présentant une expression de MYOF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.