MYH8 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400346-ACT

MYH8 kodiert die Myosin-Schwerkette 8, ein sarkomerisches Motorprotein, das die aktinabhängige Kontraktilität antreibt und zur Bildung dicker Filamente in quergestreifter Muskulatur beiträgt. Als Bestandteil des Myosin‑II‑Komplexes unterstützt MYH8 die ATP‑abhängige Krafterzeugung und beeinflusst die Organisation der Myofibrillen, die Reifung von Muskelfasern sowie die Zytoskelettdynamik. Die MYH8-Expression ist entwicklungsabhängig reguliert und häufig in spezialisierten oder sich entwickelnden Kontexten der Skelettmuskulatur angereichert, was das Gen für Studien zur Myogenese und Muskelplastizität relevant macht. Eine veränderte Regulation oder Varianten, die die Funktion des Myosinmotors beeinträchtigen, wurden mit angeborenen Myopathien und Phänotypen im Zusammenhang mit distaler Arthrogryposis in Verbindung gebracht, wodurch MYH8 mit Mechanismen neuromuskulärer Erkrankungen verknüpft ist.

MYH8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYH8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MYH8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYH8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYH8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MYH8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYH8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MYH8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MYH8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYH8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.