MYH8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400346-ACT

MYH8 codifica a cadeia pesada de miosina 8, uma proteína motora sarcomérica que impulsiona a contratilidade dependente de actina e contribui para a formação dos filamentos espessos no músculo estriado. Como parte do complexo de miosina II, MYH8 sustenta a geração de força dependente de ATP e influencia a organização das miofibrilas, a maturação das fibras musculares e a dinâmica do citoesqueleto. A expressão de MYH8 é regulada ao longo do desenvolvimento e frequentemente enriquecida em contextos especializados ou de desenvolvimento do músculo esquelético, tornando-a relevante para estudos de miogênese e plasticidade muscular. A regulação alterada ou variantes que afetam a função motora da miosina têm sido associadas a miopatias congênitas e a fenótipos relacionados à artrogripose distal, ligando MYH8 a mecanismos de doenças neuromusculares.

MYH8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYH8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYH8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYH8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYH8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYH8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYH8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYH8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYH8 em células tumorais com expressão de MYH8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.