MuRF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400797

Übersicht

TRIM63 kodiert die muskelspezifische E3-Ubiquitin-Ligase MuRF1, ein RING-Finger-Protein, das an sarkomerischen Strukturen lokalisiert und den ubiquitinabhängigen Abbau kontraktiler und regulatorischer Proteine fördert. MuRF1 wirkt im Ubiquitin-Proteasom-System und koordiniert sich mit Autophagie- und Stressantwort-Signalen, um bei Nährstoffmangel, Denervation und entzündlichen Reizen Myofibrillen umzubauen. Seine transkriptionelle und posttranslationale Regulation überschneidet sich mit FOXO-gesteuerten Atrogen-Programmen, der Insulin/IGF-1–AKT-Signalübertragung und NF-κB-assoziierten katabolen Signalwegen. Eine dysregulierte TRIM63-Aktivität ist mit Phänotypen der Skelettmuskelatrophie und einer veränderten Muskelhomöostase verbunden und stellt damit einen relevanten Knotenpunkt für Studien zu Proteostase, Stoffwechsel und Mechanismen des Muskelabbaus dar.

Das MuRF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TRIM63-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TRIM63-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TRIM63 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MuRF1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TRIM63-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MuRF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TRIM63-Exone abzielen, die für die MuRF1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TRIM63-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MuRF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MuRF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TRIM63-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MuRF1 HDR-Plasmid (h) und MuRF1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TRIM63-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TRIM63-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.