Plásmido CRISPR de Activación (h) MUL1: sc-409323-ACT

La MUL1 humana (activador 1 de la ligasa de ubiquitina mitocondrial de NF-κB), también conocida como Mulan/MAPL, codifica una ligasa E3 de ubiquitina localizada en la membrana externa mitocondrial que regula el control de calidad mitocondrial mediante la ubiquitinación de sustratos mitocondriales. MUL1 se integra en la dinámica mitocondrial al modular la maquinaria de fusión y fisión y contribuye a la mitofagia, influyendo así en la homeostasis bioenergética y en la adaptación celular al estrés. A través del crosstalk con la señalización por ubiquitina y las vías innatas de respuesta al estrés, MUL1 puede afectar la susceptibilidad a la apoptosis y las salidas de señalización inflamatoria. La actividad o expresión desregulada de MUL1 se ha implicado en fenotipos relevantes para la neurodegeneración, la disfunción metabólica y las respuestas al estrés en células cancerosas, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en la investigación de la señalización mitocondrial.

MUL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MUL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MUL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MUL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MUL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MUL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MUL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MUL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MUL1 en células tumorales con expresión de MUL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.