Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
mucolipin 2 Plasmide Double Nickase (h): sc-415216-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- mucolipin 2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il mucolipin 2 Double Nickase Plasmid (h) e il mucolipin 2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MCOLN2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: mucolipin 2 Antibody (F-1): sc-393538
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
mucolipin 2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-415216-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mucolipin 2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-415216-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MCOLN2 codifica la mucolipina 2 (TRPML2), un canale cationico endolisosomiale che regola l’omeostasi ionica delle vescicole e il traffico di membrana. L’attività di TRPML2 contribuisce alla maturazione endosoma–lisosoma, al flusso autofagico e alla funzione del fagosoma modulando la composizione ionica del lume e facilitando la fusione e l’elaborazione del carico. È particolarmente rilevante per la segnalazione dell’immunità innata e per le risposte infiammatorie in contesti mieloidi ed epiteliali, in cui le dinamiche endolisosomiali influenzano la gestione degli antigeni e il turnover dei recettori. La disregolazione dei canali della famiglia TRPML è stata associata a fenotipi di stress lisosomiale e ad alterazioni della funzione delle cellule immunitarie, rendendo MCOLN2 un bersaglio utile per studiare meccanismi centrati sul lisosoma in modelli rilevanti per la malattia.
mucolipin 2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MCOLN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MCOLN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MCOLN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MCOLN2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.