Plásmido Doble Nickase (h) mucolipin 2: sc-415216-NIC

MCOLN2 codifica mucolipina 2 (TRPML2), un canal catiónico endolisosomal que regula la homeostasis iónica vesicular y el tráfico de membranas. La actividad de TRPML2 contribuye a la maduración de endosomas y lisosomas, al flujo autofágico y a la función del fagosoma al ajustar la composición iónica luminal y facilitar la fusión y el procesamiento de la carga. Es muy relevante para la señalización inmunitaria innata y las respuestas inflamatorias en contextos mieloides y epiteliales, donde la dinámica endolisosomal determina el manejo de antígenos y el recambio de receptores. La desregulación de los canales de la familia TRPML se ha relacionado con fenotipos de estrés lisosomal y con una función alterada de las células inmunitarias, lo que convierte a MCOLN2 en una diana útil para estudiar mecanismos centrados en el lisosoma en modelos relevantes para enfermedades.

mucolipin 2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MCOLN2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MCOLN2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MCOLN2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MCOLN2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.