Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mucin 17 (h): sc-404622

Présentation

MUC17 code la mucine 17, une mucine ancrée à la membrane et fortement O‑glycosylée, enrichie à la surface apicale des cellules épithéliales gastro-intestinales, où elle contribue à la barrière muqueuse et à l’homéostasie épithéliale. La mucine 17 participe à l’hydratation de la surface cellulaire, à l’exclusion des agents pathogènes et à la protection contre les stress mécaniques et chimiques, et elle peut moduler l’adhésion et la signalisation cellulaires via des interactions au sein du glycocalyx. Des altérations de l’expression de MUC17 et des profils de glycosylation ont été rapportées dans des affections inflammatoires intestinales et dans des cancers épithéliaux, reliant cette mucine à des voies impliquées dans l’intégrité de la barrière, la différenciation et les réponses au stress. En tant que composant de l’interface de défense épithéliale, MUC17 est fréquemment étudiée dans des modèles d’inflammation muqueuse, d’interactions hôte–microbiote et de modifications, associées aux tumeurs, de l’architecture des glycoprotéines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mucin 17 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MUC17 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MUC17, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MUC17 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mucin 17.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MUC17 pour l'étude de la signalisation de Mucin 17, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MUC17 essentiels à la fonction de Mucin 17
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MUC17 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Mucin 17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Mucin 17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MUC17. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Mucin 17 plasmide HDR (h) et le Mucin 17 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MUC17 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MUC17 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.