Plásmido Doble Nickase (h) Mucin 12/MUC12: sc-400505-NIC

MUC12 codifica la mucina 12, una mucina asociada a la membrana enriquecida en superficies epiteliales, donde su dominio extracelular, fuertemente O‑glicosilado, contribuye al glicocálix protector, a la integridad de la barrera y a las interacciones célula‑célula. A través de sus efectos sobre la arquitectura de la membrana apical y del “crosstalk” de señalización dependiente de mucinas, MUC12 puede influir en los programas de diferenciación epitelial, la dinámica de adhesión y las respuestas a señales inflamatorias. Los cambios en los patrones de expresión de mucinas, incluida la desregulación de MUC12, se estudian con frecuencia en el contexto de la remodelación epitelial, la inflamación crónica y la biología de las enfermedades gastrointestinales. Como glucoproteína de superficie con extensas modificaciones de glicanos, MUC12 también es relevante para investigaciones sobre vías de glicosilación y sobre cómo la composición del glicocálix modula la homeostasis tisular.

Mucin 12/MUC12 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MUC12 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MUC12. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MUC12. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MUC12 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.