Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mts1 (h): sc-401774

Présentation

S100A4 code pour Mts1, une protéine de la famille S100 liant le Ca2+ qui agit comme régulateur de la dynamique du cytosquelette, de la motilité cellulaire et de la signalisation intercellulaire. Mts1 interagit avec des cibles telles que la myosine II non musculaire et des composants du remodelage de l’actine afin d’influencer le renouvellement des adhésions, la migration et les réponses à la matrice extracellulaire. Elle est exprimée dans de nombreux types cellulaires, notamment les fibroblastes et des populations immunitaires, et est souvent utilisée comme marqueur de l’activation de programmes stromaux. Une expression dérégulée de S100A4 a été associée au remodelage inflammatoire ainsi qu’à des phénotypes d’invasion et de métastase liés aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la fibrose tissulaire, du trafic des cellules immunitaires et de la dissémination des cellules cancéreuses.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mts1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène S100A4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du S100A4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert S100A4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mts1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en S100A4 pour l'étude de la signalisation de Mts1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de S100A4 essentiels à la fonction de Mts1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de S100A4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Mts1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Mts1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus S100A4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Mts1 plasmide HDR (h) et le Mts1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie S100A4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles S100A4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.