Plásmido CRISPR de Activación (h) mTOR: sc-400140-ACT

MTOR codifica mTOR, una quinasa de serina/treonina que integra la disponibilidad de nutrientes, la señalización de factores de crecimiento, el estado energético celular y señales de estrés para coordinar programas anabólicos y catabólicos. Como núcleo catalítico de mTORC1 y mTORC2, mTOR regula la síntesis de proteínas mediante S6K y 4E-BP1, la biosíntesis de lípidos y nucleótidos, la autofagia, la función lisosomal, la organización del citoesqueleto y la supervivencia celular a través de vías que se intersectan con la señalización PI3K–AKT. El control estricto de la actividad de mTOR es esencial para el crecimiento celular, el metabolismo y la homeostasis inmunitaria, mientras que su desregulación se asocia con frecuencia a proliferación alterada, reprogramación metabólica y autofagia aberrante. La señalización alterada de MTOR se ha vinculado a diversos contextos relevantes para la enfermedad, incluidos la biología del cáncer, procesos del neurodesarrollo y la neurodegeneración, y fenotipos metabólicos e inflamatorios.

mTOR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MTOR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

mTOR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MTOR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MTOR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de mTOR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MTOR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de mTOR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía mTOR en células tumorales con expresión de MTOR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.