MTFmt CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407106

Übersicht

MTFMT kodiert die mitochondriale Methionyl‑tRNA‑Formyltransferase (MTFmt), ein Enzym, das die Initiator‑Met‑tRNA^Met formyliert und dadurch fMet‑tRNA erzeugt – ein zentrales Substrat für die Initiation der mitochondrialen Translation. Diese Aktivität unterstützt die effiziente Synthese von Komponenten der oxidativen Phosphorylierung (OXPHOS), die von der mitochondrialen DNA kodiert werden, und trägt zur Aufrechterhaltung der Integrität der Atmungskette sowie der ATP‑Produktion bei. Eine Störung von MTFmt beeinträchtigt die mitochondriale Proteostase und kann bioenergetische Stressantworten auslösen, wodurch das Gen mit Signalwegen verknüpft ist, die die mitochondriale Genexpression, den Elektronentransport und die metabolische Homöostase steuern. Pathogene Varianten oder eine verminderte Funktion sind mit Defekten der mitochondrialen Translation und Phänotypen vereinbar, die einer kombinierten OXPHOS‑Defizienz entsprechen, was MTFMT zu einem relevanten Ziel in Studien zu Mechanismen mitochondrialer Erkrankungen macht.

Das MTFmt CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MTFMT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MTFMT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MTFMT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MTFmt-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MTFMT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MTFmt-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MTFMT-Exone abzielen, die für die MTFmt-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MTFMT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MTFmt CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MTFmt CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MTFMT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MTFmt HDR-Plasmid (h) und MTFmt HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MTFMT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MTFMT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.