MTDH Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413927-ACT

A MTDH humana (metadherina/AEG-1) é um regulador multifuncional, induzível por estresse, implicado no controle transcricional, no metabolismo de RNA e na sinalização proteica, apoiando a sobrevivência celular e respostas adaptativas. Ela interage com circuitos oncogênicos e inflamatórios, incluindo as vias NF-κB, PI3K–AKT e MAPK, e tem sido associada a alterações na adesão celular, motilidade e reprogramação metabólica. A expressão desregulada de MTDH é frequentemente associada a fenótipos de progressão tumoral e a programas de sinalização ligados à resistência em diversos modelos de câncer. Essas propriedades tornam a MTDH um nó útil para estudar a regulação em nível de rede da proliferação, invasão e respostas ao microambiente.

MTDH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MTDH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MTDH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MTDH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MTDH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MTDH. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MTDH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MTDH no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MTDH em células tumorais com expressão de MTDH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.