Plásmido CRISPR de Activación (h) MTCL1: sc-403629-ACT

MTCL1 (factor 1 de entrecruzamiento de microtúbulos) codifica una gran proteína citosquelética de tipo *coiled-coil* que organiza y estabiliza las redes de microtúbulos al entrecruzarlos y favorecer su acumulación alrededor del aparato de Golgi. A través de su función en el anclaje de microtúbulos y en la formación de arreglos de microtúbulos no centrosomales, MTCL1 contribuye a la polaridad celular, el tráfico vesicular y la migración dirigida, procesos estrechamente vinculados a la señalización dependiente del citoesqueleto y a la organización epitelial. La arquitectura alterada de los microtúbulos y el posicionamiento del Golgi desregulado se asocian con frecuencia a cambios en la proliferación y a un comportamiento invasivo, lo que hace que la regulación de MTCL1 sea relevante para estudios sobre motilidad de células cancerosas y morfogénesis tisular. MTCL1 también se utiliza como punto de entrada mecanístico para investigar cómo la remodelación del citoesqueleto influye en la dinámica de los orgánulos y en las respuestas celulares adaptativas al estrés.

MTCL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MTCL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MTCL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MTCL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MTCL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MTCL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MTCL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MTCL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MTCL1 en células tumorales con expresión de MTCL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.