Plásmido Doble Nickase (h) MT-MMP-1: sc-401028-NIC

MMP14 codifica la metaloproteinasa de matriz tipo 1 (MT-MMP-1), una endopeptidasa transmembrana que impulsa la remodelación pericelular de la matriz extracelular al escindir colágeno y otros sustratos de la matriz, y al activar la pro-MMP2. Al localizar la proteólisis en la superficie celular, MT-MMP-1 coordina la migración invasiva, el recambio de adhesiones focales y la morfogénesis tisular mediante señalización ligada a integrinas y señales derivadas de la matriz que convergen con vías como TGF-β y programas de respuesta a la hipoxia. La actividad desregulada de MMP14 se ha vinculado con una remodelación estromal alterada, un aumento de la motilidad celular y cambios en el microambiente angiogénico observados en contextos tanto fibróticos como malignos. Estas propiedades convierten a MMP14 en un nodo central para estudiar la invasión dependiente de proteasas y la señalización de la matriz en modelos celulares humanos.

MT-MMP-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MMP14 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MMP14. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MMP14. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MMP14 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.