Plasmide CRISPR d'Activation (h) MT-MMP-1: sc-401028-ACT

MMP14 code la métalloprotéinase matricielle de type membranaire 1 (MT‑MMP‑1), une protéase de surface cellulaire qui favorise le remodelage péricellulaire de la matrice extracellulaire en clivant les collagènes, les laminines et d’autres composants matriciels, et en activant la pro‑MMP2. En régulant le renouvellement des adhérences focales, la signalisation des intégrines et les dynamiques épithélio‑mésenchymateuses, MT‑MMP‑1 soutient des programmes de migration et d’invasion cellulaires essentiels à la morphogenèse tissulaire et au remodelage des plaies. Son activité s’articule avec la signalisation du TGF‑β et des facteurs de croissance afin de coordonner la protéolyse avec la réorganisation du cytosquelette et le dépôt de matrice. Une expression dérégulée de MMP14 et la fonction protéolytique de MT‑MMP‑1 ont été associées à la biologie tumorale invasive, au remodelage fibrotique et aux lésions tissulaires inflammatoires, ce qui en fait une cible largement utilisée pour étudier la signalisation dépendante de la MEC et le contrôle du comportement cellulaire par le microenvironnement.

MT-MMP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MMP14 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MT-MMP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MMP14 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MMP14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MT-MMP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MMP14 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MT-MMP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MT-MMP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MMP14 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.