Plásmido CRISPR de Activación (h) MT-MMP-1: sc-401028-ACT

MMP14 codifica la metaloproteinasa de matriz tipo membrana 1 (MT-MMP-1), una proteasa de superficie celular que impulsa la remodelación pericelular de la matriz extracelular al escindir colágenos, lamininas y otros componentes de la matriz, y al activar la pro-MMP2. Mediante la regulación del recambio de las adhesiones focales, la señalización de integrinas y la dinámica epitelio–mesénquima, la MT-MMP-1 favorece programas de migración e invasión celular fundamentales para la morfogénesis tisular y la remodelación de heridas. Su actividad se entrecruza con la señalización de TGF-β y de factores de crecimiento para coordinar la proteólisis con la reorganización del citoesqueleto y el depósito de matriz. La expresión desregulada de MMP14 y la función proteolítica de la MT-MMP-1 se han vinculado con la biología tumoral invasiva, la remodelación fibrótica y el daño tisular inflamatorio, lo que la convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudiar la señalización dependiente de la MEC y el control microambiental del comportamiento celular.

MT-MMP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MMP14 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MT-MMP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MMP14 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MMP14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MT-MMP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MMP14 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MT-MMP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MT-MMP-1 en células tumorales con expresión de MMP14 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.