Plasmide CRISPR d'Activation (h) MSH3: sc-403422-ACT

Le gène humain **MSH3** code un composant central de la machinerie de réparation des mésappariements de l’ADN, qui forme avec **MSH2** le complexe **MutSβ** afin de reconnaître les boucles d’insertion–délétion et d’autres distorsions de l’ADN associées à la réplication. En coordonnant la reconnaissance des lésions avec les étapes de réparation en aval et la signalisation des dommages, **MSH3** contribue à la stabilité du génome durant la phase S et influence le maintien des microsatellites. Une activité altérée de **MSH3** est associée à une augmentation de la charge mutationnelle, à l’instabilité des microsatellites et à une résolution défectueuse des erreurs de réplication, des caractéristiques récurrentes dans de nombreux types de cancers et d’autres troubles de l’entretien du génome. La fonction de **MSH3** est également étudiée dans le contexte du choix des voies de réparation de l’ADN, des réponses au stress réplicatif et des signatures mutationnelles.

MSH3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MSH3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MSH3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MSH3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MSH3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MSH3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MSH3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MSH3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MSH3 dans les cellules tumorales présentant une expression de MSH3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.